各種動(dòng)物外周血中性粒細胞分離液 KIT 說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品規格】200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內容如下：

 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。根據樣本量大小，分以下兩種情況：

 情況 A：血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗方法如下：

 1. 取一支 15ml 離心管，小心加入 5ml 試劑 A。

 2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-550g ，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應調整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索，以達到*分離效果。）

3. 離心后，離心管中將出現兩層環(huán)狀乳白色細胞層，上層細胞為單個(gè)核細胞層，下層細胞為中性粒細胞層。

 4. 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細胞層，如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細胞裂解（具體方法見(jiàn)“紅細胞裂解液使用說(shuō)明”）即得目的細胞。

 5. 將獲得的細胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

 6. 250g，離心 10min。

 7. 棄上清。

 8. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 9. 250g，離心 10min。

 10. 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續實(shí)驗所需相應液體重懸細胞。

 情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗方法如下：

 1. 取一支適當的離心管，依次小心加入試劑 A,試劑總量與稀釋后的樣本量相等。

 2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長(cháng)，具體離心條件需客戶(hù)自行摸索，以達到*分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。

 3. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。

 【注意事項】

 1. 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗結果，在取血 2h 內進(jìn)行實(shí)驗，血液存放時(shí)間越長(cháng)，細胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 2. 本實(shí)驗不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì )變成毛面，影響細胞分離效果。

 3. 分離液用量大于血液樣本時(shí)，分離效果更佳。

 4. 血液樣本不需稀釋?zhuān)苯舆M(jìn)行分離即可。

 5. 如實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低，請TBD以尋求幫助。

 【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。

 【參考值（參考范圍）】

 本實(shí)驗中性粒細胞提取率大于 80%。

 下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶(hù)可適當進(jìn)行參考。

1. 所獲得中性粒細胞的培養技術(shù)。

2. 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù)。

3. 所獲得中性粒細胞的鑒定方法

A.流式細胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

 1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

 2. 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區客戶(hù)可根據當地情況對離心條件進(jìn)行適當調整。建議對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對離心轉速進(jìn)行調整。

 3. 本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品略有不同，可能出現紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉速。

 注：在對離心條件進(jìn)行調整時(shí)，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到*分離效果，

 離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準。