淋巴細胞分離液使用過(guò)程問(wèn)題解答

問(wèn)題1.淋巴細胞分離液的溫度對于分離的影響有多大，有無(wú)做過(guò)不同室溫溫度及不同液體溫度下的分離效果驗證？

淋巴細胞分離液由于配制時(shí)的環(huán)境溫度即為20℃±2℃，保證該溫度下分離液密度為1.077±0.001g/mL，分離液的作用原理：密度梯度分離，分離成功的關(guān)鍵即為正確的密度保證。溫度和密度緊密，高溫度下，分離液低密度；低溫度下，分離液高密度，因此建議使用時(shí)，樣品和分離液的溫度均應為18℃-22℃之間。

建議： 使用時(shí)，環(huán)境、樣品及分離液的溫度控制均應在20℃±2℃

問(wèn)題2.如何更好的提高血液分離效率，那些因素會(huì )導致提取效率過(guò)低？

影響因素：

ü樣本新鮮程度：*分離時(shí)間為2h以?xún)?/span>

ü血液稀釋比例

ü所使用離心管直徑高度：分離液和樣本量在管中的高度不得超過(guò)管體積的2/3

ü分離液與樣本的比例：分離液至少得和上樣樣本體積一致，分離液越多越好

ü血液個(gè)體差異問(wèn)題

ü血液及分離液都不要經(jīng)過(guò)冷藏及冷凍，且使用時(shí)的溫度在18℃-22℃之間

離心力及離心時(shí)間

問(wèn)題3.每個(gè)客戶(hù)的離心機不同，是否可以使用統一的離心力提取細胞?如果使用統一的離心力提取淋巴細胞效果如何？

因為血液個(gè)體差異粘稠度、采血時(shí)間、血液量等，根據不同的因素來(lái)進(jìn)行調整?？梢越y一離心力，但需根據個(gè)體差異略有改動(dòng)。  

問(wèn)題4.有一些的離心機有升速降速速率調節，如何來(lái)設定升速降速速率以保證能得到數量及純度較高的PBMC（舉例）？有一些普通的離心機沒(méi)有升降速速率調節，PBMC層就就形成得不好，如何解決此類(lèi)問(wèn)題？

建議升速為1min，降速為3min分離效果理想。升降速時(shí)間不包含在離心時(shí)間里。

問(wèn)題5.說(shuō)明書(shū)上是針對骨髓、臍帶血、外周血標本，我們在使用過(guò)程中還會(huì )遇到胸腹水、心包積液等體液標本，那對這類(lèi)標本的分離沒(méi)有特殊分離要求？

除血液樣本以外，其他來(lái)源樣本首先要富集樣本中的細胞，要求細胞懸液濃度控制在2×108-1×109個(gè)/ml，效果*。

問(wèn)題6.有一些標本本身淋巴細胞百分比就比較低，如何盡可能的提高得率或是有無(wú)方法去除掉一些其他不要的細胞？

要選擇合適的試管、樣本要2h以?xún)冗M(jìn)行分離，分離液使用量要多余樣本量，以及離心力、離心時(shí)間、溫度要合適等。

根據樣本量制定的實(shí)驗方案:

建議：分離液用量1:1是指與上樣量1:1