超濾離心管/超濾管選購

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賽多利斯的Vivaspin 和Millipore的Amicon-Ultra超濾離心管大部分有現貨的?。?！

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用賽多利斯的Vivaspin 和Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號 的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定?？芍貜褪褂?，使用一次就扔掉太浪費。以下是個(gè)人總結的使用方 法和注意事項。
  1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，zui常見(jiàn)的是Ultra-15（10kD）。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa、 5kDa、還是30kDa？通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說(shuō)明書(shū)，注意超濾膜對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同，表格中有。
  2、新買(mǎi)來(lái)的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量*過(guò)膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過(guò)管頂的白線(xiàn)為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
  3、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾（離心機預冷至4度）。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說(shuō)明書(shū)。離心機的加速度調至zui低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后，方可離開(kāi) 離心機，否則離心機出問(wèn)題時(shí)，無(wú)法*時(shí)間處理，后果不可預測！膜與轉軸的方向根據說(shuō)明書(shū)調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實(shí)際使用中，一般轉速 開(kāi)的比說(shuō)明書(shū)里的要低，這樣可以延長(cháng)離心管的使用壽命。
  4、當濃縮到剩下1ml時(shí)，【取50ul國產(chǎn)Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒(méi)變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開(kāi)始超濾。要判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時(shí)超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止。
  5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時(shí)候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續三次，zui后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以?xún)鹊那闆r。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
  6、取出zui終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著(zhù)邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然后吸取 濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的zui后一點(diǎn)濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。zui后加入MilliQ水到超濾管中，沒(méi)過(guò) 超濾膜，防止膜失水變干。
  7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
  8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見(jiàn)的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀懸起，然后倒掉，不可用自來(lái)水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將 管芯浸入MilliQ水的燒杯（1或2L）中,放置幾個(gè)小時(shí),再換新的水,放置幾個(gè)小時(shí)，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來(lái)水洗，內壁再用 MilliQ水洗干凈。
  9、取出浸沒(méi)的管芯，加至接近滿(mǎn)的MilliQ水，50ml管也加滿(mǎn)MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水，然后蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來(lái)說(shuō)，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會(huì )壞。
 

其中賽多利斯有以下系列：

超濾系列產(chǎn)品

賽多利斯提供三種材質(zhì)的超濾膜可供客戶(hù)選擇：

聚醚砜（PES）膜：常規超濾膜，具有親水性，高流速的特點(diǎn)。尤其適合回收大分子截留物；

三醋酸纖維素（CTA）膜：親水性強，非特異性吸附極低，適合需要回收濾過(guò)液的操作；

Hydrosart®：具有極低蛋白吸附性的同時(shí)，又具有高流速的特點(diǎn)，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想選擇。

一、超濾離心管

訂購信息：

注：以上貨號為PES膜，另Vivaspin 2有CTA和Hydrosart®膜產(chǎn)品，Vivaspin 15R為Hydrosart®膜，歡迎垂詢(xún)！

二、Vivacon®系列---- DNA、蛋白樣品的濃縮和脫鹽

特點(diǎn)：

---適合DNA和蛋白樣品濃縮及更換緩沖液，非常適合稀釋的樣品

---水平模設計，配有再生纖維素超濾膜Hydrosart®

---樣品處理后，可反轉離心，保證*濃縮回收

三、Vivaflow 50/200回旋流/切向流超濾器

特點(diǎn)：

---超濾速度快，操作簡(jiǎn)單，價(jià)格經(jīng)濟

    ---全透明外殼，可隨時(shí)觀(guān)察到溶液超濾情況，殘留體積及濾膜狀況

    ---接頭可連接多塊超濾器，增加處理量，容易規模放大

Vivaflow 50性能

---處理量從100ml到5L甚至更大

---單個(gè)濾器有效膜面積50 cm²

---將500ml樣品濃縮至15ml以下，只需不到50min.

---zui小循環(huán)體積小于10ml，樣品可達到zui大限度濃縮

---殘留體積小于500ul

---拋棄型濾器

Vivaflow 200性能

---處理量從0.5L到5L甚至更大

------單個(gè)濾器有效膜面積200 cm²

---將250ml樣品濃縮至20ml以下，只需數分鐘，將1L樣品濃縮50倍，只需30分鐘，兩個(gè)超濾器并聯(lián)使用可以在75分鐘內濃縮5L樣品

---zui小循環(huán)體積小于20ml，樣品可達到zui大限度濃縮

---殘留體積小于2ml

---可重復使用

訂購信息

注：以上貨號為PES膜，另Vivaflow 200有RC膜和Hydrosart®膜產(chǎn)品，Vivaflow 50有RC膜產(chǎn)品，歡迎垂詢(xún)！