鬼筆環(huán)肽性質(zhì)

鬼筆環(huán)肽（phalloidin 鬼筆鵝膏素）
 

　　從一種毒性菇類(lèi)中分離的劇毒生物堿，C35H48N8O11S。無(wú)色，細針狀結晶，系從毒蕈類(lèi)鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中得到的有毒的環(huán)狀七肽。與鵝膏蕈堿（amanitin）一起存在，毒性比鵝膏蕈堿弱，對小鼠的致死劑量是50微克，對人體也有很強的毒性，可引起流涎、嘔吐、便血、發(fā)紺、痙攣、肌肉攣縮，以致死亡。它同細胞松弛素Ｂ的作用相反, 只與聚合的微絲結合, 而不與肌動(dòng)蛋白單體分子結合。它同聚合的微絲結合后, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動(dòng)態(tài)平衡。鬼筆環(huán)肽可以與聚合的微絲結合的特殊性質(zhì)使得它具有一個(gè)頗富前景的用途：通過(guò)讓這種毒素吸附于熒光染料上面，研究人員可以研究細胞的內部工作機制，窺視細胞如何分裂。通過(guò)這些觀(guān)察，他們可以揭開(kāi)癌癥工作機制和組織生長(cháng)之謎。
 

　　美國加州大學(xué)圣克魯斯分校的兩位化學(xué)家斯科特·洛基和勞拉·舒利斯科（Laura Schuresko）利用一種稱(chēng)為固體階段合成（solid-phase synthesis）的手法，制造出這種致命物質(zhì)。他們不是將幾種化學(xué)物質(zhì)放入燒瓶混合，讓它們自由飄浮，而是在化學(xué)反應期間對其中一種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行適當約束，這樣一來(lái)，研究人員在復雜的化學(xué)反應過(guò)程中可以更好地對其進(jìn)行控制。
 

　　FITC和Rhodamin等熒光物質(zhì)標記的鬼筆環(huán)肽可特異的與真核細胞的F-acting結合，從而顯示微絲骨架在細胞中的分布。鬼筆環(huán)肽的配制：0.1mg鬼筆環(huán)肽溶于1ml無(wú)水甲醇（也可用DMSO或無(wú)水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長(cháng)期保存，工作液的濃度為5ug/ml，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
 

　　染色程序：
 

　　生理鹽水PBS清洗細胞2次，每次10分鐘；
 

　　3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；
 

　　加入5ug/ml的FITC-鬼筆環(huán)肽室溫染色30-60分鐘，夏季時(shí)間可以短一些，生理鹽水PBS清洗細胞2次；
 

　　DAPI或hoechst33258染細胞核10分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；
 

　　吸去多余水分，加熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片，熒光或共聚焦顯微鏡下觀(guān)察。
 

　　注意事項：
 

　　鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過(guò)細胞，不需要對細胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
 

　　藥品價(jià)格昂貴，0.1mg的售價(jià)接近兩千元，要節約使用。
 

　　毒性較大，戴上手套操作。