elisa實(shí)驗過(guò)程中可能出現的問(wèn)題及處理!（轉）

更新時(shí)間：2009-05-11

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elisa實(shí)驗過(guò)程中可能出現的問(wèn)題及處理!
一般來(lái)講，實(shí)驗失敗應當是技術(shù)錯誤，設備損壞或反應物失效。當一個(gè)實(shí)驗失敗，檢查每個(gè)反應物的有效期并且確定所有的反應物均是按產(chǎn)品標示的說(shuō)明來(lái)存放的。另外，查看注意事項部分內容。當進(jìn)行試驗時(shí)如果出現可疑的現象或發(fā)生問(wèn)題，可以參照下表來(lái)分析問(wèn)題。

可能問(wèn)題	可能原因	采用措施
無(wú)顏色	漏加酶標抗體	檢查操作流程，注意不要漏加
	酶標抗體污染了疊氮鈉	應嚴格避免疊氮鈉的污染
	不同試劑盒組份混用	檢查試劑標簽，確認所有組份屬于試劑盒中
顯色弱	產(chǎn)品已經(jīng)超過(guò)有效期	檢查產(chǎn)品有效期
	加入的試劑的體積和時(shí)間有誤	確認所使用的每一個(gè)試劑的體積正確和加入的時(shí)間是符合說(shuō)明書(shū)要求的
	試劑、樣品用前未能平衡	試劑、樣品用前置室溫平衡30分鐘
	孵育時(shí)間不足	檢查孵育時(shí)間
	在溫度變化的環(huán)境內孵育酶標板	確定孵育的溫度，避免溫度變化
	儀器設定不正確，濾光片不匹配	儀器是否設定正確，濾光片的使用是否正確
	使用了被污染的試劑	檢查試劑是否被污染
	拍板不*	經(jīng)拍板后板子要干
整板黃	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
	吸頭重復使用	吸頭應一次性使用
	器材被污染	應使用無(wú)污染的器材
	底物液被污染	更換底物液
高復孔比	洗板不*	洗板部分一定要做得*
	出現干板，沒(méi)有使用密封袋，密封袋重復使用	酶標板應保持濕潤，使用密封袋孵育，注意每步更換新的密封袋
	拍干不充分	經(jīng)拍板后板子要干
	孔內加液體積不均等	確定移液器已校正并且工作正常，吸頭不得重復使用
	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
高本底	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
	每孔加液體積不均等	確定移液器已校正并且工作正常
	洗板不*	洗板部分一定要做得*
	拍干不充分	經(jīng)拍板后板子要干
	試驗中孵育時(shí)間溫度和時(shí)間不適當	確認每一實(shí)驗步驟的孵育溫度和時(shí)間是否適當
	酶標抗體稀釋錯誤	確認工作濃度酶標抗體配置正確
	底物液受光照時(shí)間較長(cháng)或污染	底物液應在使用前打開(kāi)，并避免強光照射
	吸頭重復使用	吸頭應一次性使用
標準曲線(xiàn)線(xiàn)性差	標準加樣錯誤	確定移液器已校正并且工作正常
	酶標抗體濃度過(guò)低	確認工作濃度酶標抗體配置正確
	酶標板顯色孵育時(shí)間、溫度不足	按說(shuō)明書(shū)要求操作
	操作不慎	回顧操作流程，嚴格按說(shuō)明書(shū)要求操作

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